Effect of sciadopitysin on sodium arsenite-induced senescence of rat hippocampal neurons
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摘要:[背景] 长期砷暴露人群除表现出典型的皮肤损害体征外，往往还伴随神经行为异常症状和体征。
[目的] 探讨金松双黄酮对亚砷酸钠致大鼠神经细胞衰老的干预效应以及细胞周期相关转录因子E2F1在其中可能的介导作用。
[方法] 采用4 μmol·L−1亚砷酸钠作用于SH-SY5Y细胞24 h，并分别使用50 μg·mL−1银杏叶提取物EGb761及四种主要银杏叶双黄酮（异银杏双黄酮、7-去甲基银杏双黄酮、金松双黄酮和银杏双黄酮）干预24 h，采用CCK-8法测定细胞活性。将32只180~200 g SPF级大鼠随机分为对照组、染砷组（10 mg·L−1）、银杏叶提取物干预组（10 mg·kg−1）和金松双黄酮干预组（10 mg·kg−1），每组8只，雌雄各半。采用自由饮水方式进行染毒，连续染毒3个月；干预在染毒2个月后进行，采用灌胃的方式进行给药，干预1个月。采用HE染色法检测大鼠海马结构的改变，采用尼氏染色法检测海马形态及神经细胞数量的改变。此外，分别采用β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色法和Western blotting法检测海马神经细胞的衰老情况及E2F1的表达水平。
[结果] 与染砷组相比，银杏叶提取物和四种主要的银杏叶双黄酮均有不同程度的细胞活性恢复作用（均P＜0.05），其中金松双黄酮相对于银杏叶提取物在拮抗亚砷酸钠神经细胞毒性方面具有更好的活性恢复作用（P＜0.05）。HE染色和尼氏染色结果表明：与对照组相比，染砷组大鼠海马神经细胞明显减少且突触结构异常，细胞发生肿胀、核皱缩，出现空泡现象；与染砷组大鼠比较，银杏叶提取物干预组和金松双黄酮干预组大鼠海马神经细胞明显增多且突触结构较正常。SA-β-gal染色结果表明：与对照组（2.88±0.84）相比，染砷组（15.75±3.01）的衰老细胞数量明显增加（P＜0.05）；与染砷组相比，银杏叶提取物干预组（9.38±1.92）和金松双黄酮干预组（7.75±2.38）衰老细胞数量明显下降（均P＜0.05）。Western blotting结果表明：与对照组（1.00±0.17）相比，染砷组（0.65±0.19）海马中E2F1蛋白表达明显降低（P<0.05）；与染砷组相比，金松双黄酮干预组（0.89±0.18）海马中E2F1蛋白表达水平明显恢复（P<0.05）；与银杏叶提取物干预组（0.68±0.19）相比，金松双黄酮（0.89±0.18）对E2F1表达水平的恢复效果较好（P＜0.05）。相关性分析结果表明，E2F1蛋白表达水平与海马神经细胞SA-β-gal染色阳性率呈负相关（r=−0.518，P＜0.05）。
[结论] 金松双黄酮是银杏叶提取物的有效活性成分，其可有效抑制亚砷酸钠诱导的海马神经细胞衰老，E2F1可能在其中发挥重要的介导作用。
Abstract:[Background] In addition to the typical signs of skin damage, long-term arsenic exposure is often accompanied by signs and symptoms of neurobehavioral abnormalities.
[Objective] To investigate potential intervention effect of sciadopitysin on senescence of neurons induced by sodium arsenite in rats and possible underlying mediating effect of cell cycle-related transcription factor E2F1.
[Methods] SH-SY5Y cells were treated with 4 μmol·L−1 sodium arsenite for 24 h and intervened with 50 μg·mL−1 Ginkgo biloba extract (EGb761) or four major biflavonoids in Ginkgo biloba leaves (isoginkgetin, bilobetin, sciadopitysin, and ginkgetin) for 24 h respectively. Then, cell viability was measured by CCK-8 assay. Thirty-two 180-200 g SPF rats were randomly divided into a control group, an arsenic treatment group (10 mg·L−1), a Ginkgo biloba extract intervention group (10 mg·kg−1), and a sciadopitysin intervention group (10 mg·kg−1), 8 rats in each group, half male and half female. The rats were treated with sodium arsenite by free drinking water for 3 consecutive months, and the intervention treatment was conducted after 2 months of poisoning with drug intake by gavage for 1 month. HE staining was used to detect structural changes in the hippocampus, while Nissl's staining was used to detect changes in hippocampal morphology and neuron numbers. Moreover, senescence-associated β galactosidase (SA-β-gal) staining and Western blotting were used to detect senescence of hippocampal neurons and the expression level of E2F1, respectively.
[Results] Compared to the arsenic treatment group, EGb761 and the four biflavonoids in Ginkgo biloba leaves effectively antagonized the inhibitory effect of sodium arsenite on cell viability (all Ps＜0.05), and sciadopitysin showed better restoration of cellular viability than Ginkgo biloba extract (P＜0.05). The results of HE staining and Nissl's staining showed that the hippocampal neurons in the arsenic treatment group were reduced in cell count and the synaptic structure was abnormal, with swelling, nuclear shrinkage, and vacuole, compared with the control group. The results of SA-β-gal staining showed that the number of senescent cells in the arsenic treatment group (15.75±3.01) was significantly increased compared with the control group (2.88±0.84) (P＜0.05); the numbers of senescent cells in the Ginkgo biloba extract group (9.38±1.92) and the sciadopitysin treatment group (7.75±2.38) were significantly decreased compared with the arsenic treatment group (all Ps＜0.05). The results of Western blotting showed that compared with the control group, the expression of E2F1 protein in hippocampus of the arsenic treatment group was significantly decreased (1.00±0.17 vs. 0.65±0.19, P<0.05); compared with the arsenic treatment group, the protein expression level of E2F1 in hippocampus of the sciadopitysin treatment group (0.89±0.18) was significantly recovered (P<0.05); compared withGinkgo biloba extract (0.68±0.19), sciadopitysin had a better recovery effect on E2F1 expression level (0.89±0.18) (P＜0.05). The results of correlation analysis showed that the E2F1 protein expression level was negatively correlated with the positive rate of SA-β-gal staining in hippocampal neurons (r=−0.518,P＜0.05).
[Conclusion] Sciadopitysin is an effective component of Ginkgo biloba extract. It can effectively inhibit the senescence of hippocampal neurons induced by sodium arsenite, and E2F1 may play an important mediating role.
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Keywords:
- sodium arsenite /
- sciadopitysin /
- hippocampus /
- senescence of neurons
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环境砷暴露是一个全球性公共卫生问题，目前全世界有超过2亿人口的饮用水砷含量超标，主要分布于印度、孟加拉国、美国及中国等地[1-2]。砷中毒患者表现为全身性多器官多系统慢性损伤，患者除具有典型的皮肤损害体征外，往往还伴随神经行为异常症状和体征。该病由于其中毒机制不清，缺乏有效的治疗药物，至今尚未完全得到控制。流行病学研究表明，成人慢性砷暴露可导致脑病发生和高级神经系统功能障碍，如学习、近期记忆和注意力受损[3]。砷具有神经毒性，可穿过血脑屏障损伤脑组织，对人体中枢神经系统造成不同程度损害[4-5]，一般表现为头晕、头痛、失眠、多梦、嗜睡等。动物研究表明，长期无机砷暴露可损害大鼠学习记忆能力[6]。
研究表明，神经细胞受到外界刺激可诱导其发生氧化应激、免疫炎症和DNA损伤反应等，这些因素均可引起神经细胞发生衰老，长期衰老的神经细胞累积可进一步造成神经功能障碍，从而引发多种神经系统疾病[7-8]。有研究表明，砷可诱导人软骨细胞衰老，加速大鼠关节软骨老化[9]。另据报道，阿尔茨海默病等神经系统疾病的发生与长期低水平砷暴露有关[10]。然而，无机砷暴露是否可引起神经细胞衰老尚不明确。细胞周期停滞是细胞衰老的重要表现，细胞周期转录因子E2F1在调节细胞周期、增殖、分化和衰老方面起着关键作用，可促进S期进入、DNA合成和有丝分裂的基因表达。段浩茹等[11]研究发现，E2F1在大鼠子宫衰老过程中起调控作用。E2F1与细胞衰老的关系密切，其可通过调控细胞增殖、自噬及DNA损伤修复等相关基因的表达抑制细胞衰老。我们前期研究发现，亚砷酸钠可抑制肝细胞E2F1的表达和磷酸化水平，进而导致肝细胞活性下降[12]。因此，阐明E2F1在亚砷酸钠致神经细胞衰老中的作用可为缓解砷致神经系统损伤提供有效的干预靶点。
贵州省拥有丰富的银杏资源，银杏叶双黄酮是银杏叶提取物重要的有效成分之一。有研究表明金松双黄酮具有抗肿瘤、抗氧化[13]、抗衰老[14]、降低血糖血脂等作用，而金松双黄酮是银杏叶双黄酮中的主要组分之一。银杏叶提取物是治疗心脑血管疾病的常用药，对临床和实验性神经系统损伤存在有益作用。然而，在长期砷暴露引起的神经损伤中，金松双黄酮是否能发挥其神经保护作用鲜有研究报道。本研究通过构建砷暴露大鼠及金松双黄酮干预模型，检测其海马组织结构的改变及转录因子E2F1蛋白表达变化，探究亚砷酸钠染毒对大鼠神经系统的损伤作用及金松双黄酮的干预效果，为人群砷中毒的防治提供实验依据。
1. 对象与方法
1.1 银杏干预药物筛选
将SH-SY5Y细胞以2×104个·孔−1接种于96孔板中，细胞贴壁后，采用4 μmol·L−1亚砷酸钠作用于SH-SY5Y细胞24 h，并分别使用50 μg·mL−1银杏叶提取物EGb761（德国威玛舒培博士药厂）及四种主要银杏叶双黄酮（异银杏双黄酮、7-去甲基银杏双黄酮、金松双黄酮和银杏双黄酮，成都普瑞法科技开发有限公司）干预24 h，采用CCK-8法测定细胞活性。24 h后取出培养板，在每个孔中添加10 μL的CCK-8溶液，放在37 ℃、5% CO2条件下孵育2 h。用酶标仪测定每个孔在波长450 nm的光密度值，光密度值越大代表细胞活性越高。
1.2 实验动物分组及染毒方法
选择健康SPF级SD大鼠32只，雌雄各半，体重为180~200 g，购自贵州医科大学动物实验中心，动物合格证号为SCXK（辽）2020-0001；饲养于贵州医科大学动物实验中心清洁级实验动物饲养房，温度为20~25 ℃，湿度为60%~70%，照明为每天12 h。实验期间，动物可自由饮水、摄食。本实验获得贵州医科大学伦理委员会批准（批准号：1900212），符合动物伦理学要求。
含砷染毒溶液的配制：准确称取适量的亚砷酸钠溶于去离子水后，稀释至10 mg·L−1，调节至pH 7.0，备用。
适应性饲养1周后，将大鼠按体重随机分为对照组（去离子水，标准饲料）、染砷组（10 mg·L−1）、银杏叶提取物干预组（10 mg·kg−1）和金松双黄酮干预组（10 mg·kg−1），每组8只，雌雄各半。采用自由摄食和饮水方式进行染毒，连续染毒3个月；干预在染毒2个月后进行，药物摄入采用灌胃的方式，干预1个月。每周测定并记录大鼠的体重。
1.3 大鼠体量及脑脏器系数的测定
染毒结束后，大鼠禁食12 h称重，经腹腔注射0.9%戊巴比妥钠麻醉后处理大鼠，立即心脏采血并分离脑组织，称重并计算脑组织脏器系数。脏器系数=(脑组织质量/体重)×100%。
1.4 HE染色法检测大鼠海马结构
取大鼠大脑的矢状面大海马，用10%多聚甲醛液固定48 h，经常规脱水后进行石蜡包埋、切片，常规HE染色，梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。光学显微镜下观察，图像采集分析。
1.5 尼氏染色法检测海马形态及神经细胞数量
取大鼠大脑的矢状面大海马，用10%多聚甲醛液固定48 h，经常规脱水后石蜡包埋、切片。常规脱水后，加入适量的甲苯基紫染色液覆盖组织，于56 ℃烤箱中浸染1 h，去离子水冲洗，尼氏分化液分化2 min，无水乙醇迅速脱水。二甲苯透明，中性树胶封片。光学显微镜下观察，图像采集分析。
1.6 β-半乳糖苷酶（senescence- associated β- galactosidase, SA-β-gal）染色法检测海马神经细胞衰老情况
将含有海马区部位的脑组织冰冻切片加入SA-β-gal染色固定液室温固定20 min；用磷酸盐缓冲液（PBS）浸泡洗涤组织3次，每次5 min；加入适量的染色工作液，37 ℃孵育过夜，光学显微镜下观察，图像采集分析。
1.7 Western blotting法检测大鼠海马组织中E2F1的表达水平
取海马组织进行匀浆，采用二喹啉甲酸（BCA）蛋白测定试剂盒进行蛋白定量。取相同量的蛋白，进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），接着转移到聚偏氟乙烯（PVDF）膜上。将膜于含5%脱脂奶粉的1×含0.05% Tween20的三羟甲基氨基甲烷缓冲液（TBST）中封闭2 h，1×TBST洗涤5 min，加入抗E2F1一抗（1∶1 000稀释）及抗β-actin（1∶5 000稀释），4 ℃孵育过夜；次日早上1×TBST洗涤3次，每次10 min，加入二抗IgG-辣根过氧化物酶（HRP）（1∶8 000稀释），室温孵育1 h，1×TBST洗涤4次，每次15 min。采用增强型化学发光（ECL）试剂进行显色反应，用凝胶成像系统Image LabTM 2.0软件分析蛋白条带平均光密度值。采用目标蛋白和内参蛋白（E2F1和β-Actin）的平均光密度比值表示蛋白的相对表达水平。
1.8 统计学方法
采用SPSS 25.0软件进行统计学分析，实验数据均以均数±标准差表示。多组间比较采用单因素方差分析，进一步组间两两比较，方差齐时采用Bonferroni检验，方差不齐时采用Tamhane’s T2检验；各指标间的相关性分析采用Spearman相关分析。检验水准α=0.05。
2. 结果
2.1 银杏叶提取物活性成分及浓度筛选
CCK-8实验结果表明，与对照组相比，4 μmol·L−1亚砷酸钠可明显抑制细胞活性（P＜0.05）；与染砷组相比，银杏叶提取物和四种主要的银杏叶双黄酮均可不同程度地恢复细胞活性（均P＜0.05），与银杏叶提取物干预组比较，金松双黄酮具有较好的细胞活性恢复作用（P＜0.05），见图1。
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图 1四种银杏叶双黄酮在亚砷酸钠致神经细胞活性抑制中的作用
*：P＜0.05。 Figure 1.Effects of four biflavonoids in Ginkgo biloba leaves on sodium arsenite-induced inhibition of neuronal viability
2.2 大鼠的一般情况
实验期间，各组大鼠均未出现死亡。各组大鼠饮食、饮水量正常，毛发、活动、精神状态等均无明显异常；染砷组大鼠毛发色泽变得暗淡，活动量呈不同程度的降低。随着时间延长，各组大鼠体重增长速度相对稳定，各组之间差异无统计学意义（均P＞0.05），见表1。
表 1亚砷酸钠染毒对大鼠体重的影响（n=4，
${ \bar {x} \pm {s}}$ ）Table 1.Effects of sodium arsenite on body weight of rats (n=4,
$ \bar x \pm s $ )单位（Unit）：g 组别 雄性 雌性 染毒前 第一个月 第二个月 第三个月 染毒前 第一个月 第二个月 第三个月 对照组 224.25±12.87 367.06±61.47 497.47±47.39 568.34±51.60 202.25±10.69 247.38±19.87 287.01±24.42 301.33±18.41 染砷组 215.00±4.24 350.75±62.92 470.99±25.44 512.84±35.93 207.50±8.66 246.94±15.62 271.86±16.43 287.13±19.23 银杏提取物干预组 221.75±4.57 358.50±52.40 477.56±35.14 534.79±39.27 207.25±7.27 242.69±15.28 271.46±12.26 288.64±14.40 金松双黄酮干预组 222.75±11.41 326.50±75.87 488.99±30.40 551.46±28.77 205.25±5.85 243.88±15.94 278.72±28.72 288.64±14.40 P ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 2.3 大鼠脑组织脏器系数测定结果
对照组、染砷组、银杏提取物干预组、金松双黄酮干预组雄性大鼠脑组织脏器系数分别为（0.35±0.04）%、（0.42±0.04）%、（0.42±0.03）%、（0.38±0.03）%，雌性依次为（0.63±0.04）%、（0.70±0.07）%、（0.77±0.08）%、（0.84±0.03）%。与对照组比较，金松双黄酮干预组雌鼠脑组织的脏器系数明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。
2.4 大鼠脑组织病理学观察结果
2.4.1 海马神经细胞的损伤
通过HE染色和尼氏染色观察到：对照组大鼠海马神经细胞形态和数量正常；染砷组大鼠海马神经细胞数量明显较对照组减少且突触结构异常，细胞发生肿胀、核皱缩，出现空泡现象（图2）；与染砷组大鼠比较，银杏叶提取物干预组和金松双黄酮干预组大鼠海马神经细胞明显增多且突触结构较正常，肿胀和空泡样变性的细胞明显减少，见图3。
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图 2HE染色观察四组大鼠海马神经细胞损伤情况
A：对照组；B：染砷组；C：银杏叶提取物干预组；D：金松双黄酮干预组。箭头所示：大鼠海马神经细胞数量较对照组明显减少，细胞发生肿胀、核皱缩，出现空泡现象。 Figure 2.Rat hippocampal neuron injury of four groups by HE staining
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图 3尼氏染色观察四组大鼠海马神经细胞数量及形态改变
A：对照组；B：染砷组；C：银杏叶提取物干预组；D：金松双黄酮干预组。箭头所示：大鼠海马神经细胞数量较对照组明显减少且突触结构异常，出现空泡现象。 Figure 3.Changes in the number and morphology of rat hippocampal neurons of four groups by Nissl's staining
2.4.2 海马神经细胞衰老
SA-β-gal染色结果表明：与对照组相比，染砷组的衰老细胞数量明显增加（P＜0.05）；与染砷组相比，银杏叶提取物干预组和金松双黄酮干预组衰老细胞数量明显下降（均P＜0.05）。结果见图4。
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图 4SA-β-gal染色观察四组大鼠海马神经细胞衰老情况
A：对照组；B：染砷组；C：银杏叶提取物干预组；D：金松双黄酮干预组；E：衰老细胞数量。阳性产物呈蓝色，染色深浅表示阳性程度。*：P＜0.05。 Figure 4.Senescence of rat hippocampal neurons of four groups by SA-β-gal staining
2.5 大鼠海马组织E2F1蛋白表达及其与细胞衰老的相关性
Western blotting实验结果表明：与对照组相比，染砷组大鼠海马中E2F1蛋白表达明显降低（P＜0.05）；与染砷组相比，金松双黄酮干预组海马中E2F1蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）；与银杏叶提取物相比，金松双黄酮对E2F1表达水平的恢复效果较好（P＜0.05）。结果见图5。大鼠海马中转录因子E2F1的表达与海马神经细胞SA-β-gal染色阳性率呈负相关（r=−0.518，P＜0.05）。
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图 5金松双黄酮在亚砷酸钠抑制大鼠海马E2F1表达中的作用
A：电泳图；B：蛋白表达量。*：P＜0.05；**：P＜0.01。 Figure 5.Effects of sciadopitysin on sodium arsenite-induced inhibition of E2F1 expression in rat hippocampus
3. 讨论
本研究结果表明，亚砷酸钠染毒3个月可诱导大鼠海马神经细胞发生衰老及E2F1蛋白水平降低，金松双黄酮可有效抑制亚砷酸钠所引起的神经细胞衰老效应并恢复E2F1表达水平。
越来越多的研究发现，无机砷暴露可引起神经细胞损伤。Mehta等[15]研究表明，无机砷可引起神经细胞凋亡，轴突形成异常，氧化损伤加重。在砷暴露3个月的大鼠模型中发现，亚砷酸钠除可引起神经细胞减少和轴突异常，还可诱导其发生衰老；而神经细胞衰老是导致多种神经行为异常的关键机制[16]。因此，预防无机砷所诱导的神经细胞衰老可有效缓解神经系统疾病的发生发展。
银杏叶提取物EGb761是目前临床上广泛用于治疗脑损伤等心脑血管疾病的常用药物，具有抗氧化、抗肿瘤、神经保护及抗衰老等功效。Savaskan等[17]研究发现EGb761具有抗衰老功效。此外，Kandiah等[18]研究表明，EGb761具有神经保护作用。本课题组前期研究发现，银杏叶提取物可减轻亚砷酸钠对肝细胞的毒性作用[19]。本研究进一步发现，10 mg·kg−1剂量EGb761可有效缓解亚砷酸钠诱导的大鼠海马神经细胞衰老并有效促进E2F1表达水平。银杏双黄酮是银杏叶提取物中的主要黄酮成分，具有抗氧化[20]、抗炎[21]、抗肿瘤[22]、神经保护[23]、抗肥胖[24]等功效。为进一步阐明EGb761的有效活性成分，本研究选取银杏叶双黄酮主要组分进行体外活性筛选，发现金松双黄酮对细胞活性的恢复效果最佳。体内研究表明，金松双黄酮和EGb761均具有拮抗砷致神经细胞衰老功效，且金松双黄酮干预效果更佳，表明金松双黄酮为银杏叶提取物的有效活性成分。
E2F1是一种细胞周期相关转录因子，具有多种生物学调控功能，如调控细胞活性、凋亡、自噬、衰老等。Zhang等[25]研究发现促进E2F1表达可使初级皮质神经元DNA损伤减轻，抑制E2F1表达会加重DNA损伤和凋亡，揭示了E2F1在神经系统损伤中的影响。本课题组前期研究发现，亚砷酸钠可抑制肝细胞中E2F1的表达[12]。本研究进一步发现，亚砷酸钠染毒大鼠海马组织E2F1表达下调，且E2F1表达水平与脑组织海马区SA-β-gal染色阳性率呈负相关，提示E2F1可能介导了无机砷对神经系统衰老的影响；而金松双黄酮可有效恢复E2F1的表达水平，进一步证明E2F1可能在砷致神经细胞衰老中具有重要介导作用。
综上，本研究发现金松双黄酮可拮抗亚砷酸钠所诱导的海马神经细胞衰老，E2F1在其中可能发挥重要介导作用。
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图 1
四种银杏叶双黄酮在亚砷酸钠致神经细胞活性抑制中的作用
*：P＜0.05。 Figure 1.
Effects of four biflavonoids in Ginkgo biloba leaves on sodium arsenite-induced inhibition of neuronal viability
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图 2
HE染色观察四组大鼠海马神经细胞损伤情况
A：对照组；B：染砷组；C：银杏叶提取物干预组；D：金松双黄酮干预组。箭头所示：大鼠海马神经细胞数量较对照组明显减少，细胞发生肿胀、核皱缩，出现空泡现象。 Figure 2.
Rat hippocampal neuron injury of four groups by HE staining
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图 3
尼氏染色观察四组大鼠海马神经细胞数量及形态改变
A：对照组；B：染砷组；C：银杏叶提取物干预组；D：金松双黄酮干预组。箭头所示：大鼠海马神经细胞数量较对照组明显减少且突触结构异常，出现空泡现象。 Figure 3.
Changes in the number and morphology of rat hippocampal neurons of four groups by Nissl's staining
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图 4
SA-β-gal染色观察四组大鼠海马神经细胞衰老情况
A：对照组；B：染砷组；C：银杏叶提取物干预组；D：金松双黄酮干预组；E：衰老细胞数量。阳性产物呈蓝色，染色深浅表示阳性程度。*：P＜0.05。 Figure 4.
Senescence of rat hippocampal neurons of four groups by SA-β-gal staining
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图 5
金松双黄酮在亚砷酸钠抑制大鼠海马E2F1表达中的作用
A：电泳图；B：蛋白表达量。*：P＜0.05；**：P＜0.01。 Figure 5.
Effects of sciadopitysin on sodium arsenite-induced inhibition of E2F1 expression in rat hippocampus
表 1
亚砷酸钠染毒对大鼠体重的影响（n=4，
${ \bar {x} \pm {s}}$ ）Table 1
Effects of sodium arsenite on body weight of rats (n=4,
$ \bar x \pm s $ )单位（Unit）：g 组别 雄性 雌性 染毒前 第一个月 第二个月 第三个月 染毒前 第一个月 第二个月 第三个月 对照组 224.25±12.87 367.06±61.47 497.47±47.39 568.34±51.60 202.25±10.69 247.38±19.87 287.01±24.42 301.33±18.41 染砷组 215.00±4.24 350.75±62.92 470.99±25.44 512.84±35.93 207.50±8.66 246.94±15.62 271.86±16.43 287.13±19.23 银杏提取物干预组 221.75±4.57 358.50±52.40 477.56±35.14 534.79±39.27 207.25±7.27 242.69±15.28 271.46±12.26 288.64±14.40 金松双黄酮干预组 222.75±11.41 326.50±75.87 488.99±30.40 551.46±28.77 205.25±5.85 243.88±15.94 278.72±28.72 288.64±14.40 P ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 
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1. 赵栋礼，李姿柔，闫佳浩，武薇，崔晓燕，于永洲. 基于网络药理学和分子对接技术探究鸭跖草治疗高热惊厥的作用机制. 神经药理学报. 2024(01): 1-10 . 
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